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无血清细胞冻存液的操作规范：  1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等。选择状态良好的细胞进行冻存操作(注：贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数;悬浮生长细胞，进行细胞计数)。  2、500～1000g离心5min，弃上清。  3、加入适量的细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到1～10×106/ml，置于冻存管中密闭。  4、采取逐级降温保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃过夜，***置于液氮罐中长期存储。  注意：  务必超净工作台内无菌操作，避免污染。  杂交瘤细胞冻存时应定期复苏，以检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性。血清能提供促接触和伸展因子，使细胞贴壁免受机械损伤，对培养中的细胞起到某些保护作用.gibco南美血清价格

  血清对培养中的细胞起到某些的保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和的作用。这种作用是偶然发现的，则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢中起重要的作用，如SeO3,硒等等.南京优等胎牛血清 厂家用于细胞培养的血清主要是牛血清.

T细胞增殖试验类型  (1) 形态法：其原则是将外周血液或分离的单个细胞与适量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。据细胞的大小、核与胞浆的比例、胞浆的染色性和核结构以及有无核仁等特征，分别计数淋巴母细胞、过渡性母细胞和核有丝分裂相以及成熟的小淋巴细胞，以前三者为转化细胞，每份标本计数200个细胞，计算转化率。   (2) 核素法：绝大多数外周血T细胞通产处于细胞周期的G0期，受特异性抗原或促有丝分裂原后，从G0期进入G1期，开始合成蛋白质、RNA和DNA前体物质等，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的TdR，后者掺入新合成的DNA中

牛血清的主要成份1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着；α2巨球蛋白压抑胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着；转铁蛋白能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用。2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员之一，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。促生长：促细胞增殖效应。氢化可的松：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的氢化可的松，如细胞密度高时可能有压抑细胞的作用和诱导其发生分化。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的.

血浆血浆是血液的液体成分，血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白，还包括葡萄糖、无机盐离子、***以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞，同时也是运输分泌产物的主要媒介。将新鲜血液离心，使血细胞沉降，上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。中文名血清定义指纤维蛋白原已被除去的血浆用法肌肉或静脉注射外文名Serum作用提供***和各种生长因子等形态淡黄色透明液体能够维持培养基的pH 值，起酸碱缓冲液作用；重庆胎牛血清 封闭

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何谓热灭活

一般是以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化。

有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 "小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

购买的时候注意询问厂家是否是已灭***清。 gibco南美血清价格