上海mtt法和cck8的区别

时间:2021年05月24日 来源:

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了,这个时间细胞已经贴壁完全,而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间,我的实验摸了3个时间,24h,48h,72h。然后根据数据的稳定性(RSD)、OD值的范围(1.0左右)这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了,细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量,说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题:假设我要孔内是200微升的体系,即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢,还是细胞悬液+药液=200微升,cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。5、cck8试剂加入后孵育时间,随着时间的增加,OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。那它的用途也就大致可以猜到,和细胞增殖、细胞毒性相关的实验都可以。上海mtt法和cck8的区别

酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;◆细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到比较好测定时间。实验二:细胞增殖-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5%CO2)。2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。4、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。上海mtt法和cck8的区别细胞增殖测定:细胞增殖实验在很多领域都会用到,比如**相关、损伤后修复等。

CCK-8的用途1.细胞增殖测定:细胞增殖实验在很多领域都会用到,比如**相关、损伤后修复等。2.***筛选:在测定一个***的毒性和安全有效浓度时,经常会用到CCK-8。3.细胞毒性测定:这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响,比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。4.**药敏试验:这个是用的比较广的,我见过做**的团队,买CCK-8都是一整箱,一整箱的买,比如果子老师所在的团队,哈哈哈。5.微生物对细胞的毒性或增殖的实验

酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰,可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染,以免影响结果。

· CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月,在-20℃下避光可以保存1年。

· 当在培养箱内培养时,培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,**外一圈的孔加培养基或者PBS,不作为测定孔用。

· 在培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时,还应考虑***的吸收,可在加入***的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。 **药敏试验:这个是用的比较广的,我见过做**的团队,买CCK-8都是一整箱,一整箱的买。

经验总结及分享: 

CCK8的说明书大家一定要认真阅读,里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值,因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何,做这个试验一定要摸条件。你就算再懒,这个懒不得,否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提, 如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。

摸条件包括1、种板数;2、种板后细胞的贴壁生长时间;3、加药后的孵育时间;4、cck8试剂加入量;5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多,其实这就是一个实验。而且都是种的空白板,也就是不加***,只加细胞和CCK8。 将她培养板在培养箱内孵育1-4小时。浙江cck8和mtt的比较

CCK8虽好,这些情况下不建议用!上海mtt法和cck8的区别

CCK8检测细胞增殖/毒性的方法:

1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后,完全培养基重悬成细胞悬液,并计数。

2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度(多数为1000-2000 cell/well),每组3-5重复,每孔100-200μl培养基。根据实验设计决定铺板数量(如需要检测5天,则铺5张96孔板),我们以1000 cell/well,5复孔,200μl培养基,检测5天为例,各实验组需要细胞数量为1000×5×5个细胞,从计数好的细胞悬液中取出所需的细胞量和完全培养基混匀,**终体积为200×5×5μl。 上海mtt法和cck8的区别

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