江苏cck8细胞增殖实验原理

时间:2022年02月10日 来源:

CCK-8没有具体规定反应时间的长短,以具体反映比较好显色的时间为主。因为不同的细胞反应时间、显色标准都不一样,所以一定要设置预实验。预实验中,可以先做几个孔摸索一下接种数量和培养时间。3、悬浮细胞比贴壁细胞难显色。在加入CCK-8培养后,可每隔一小时观测一下颜色的变化情况,或者之间用酶标仪检测更为准确。4、CCK8作用时间越长,OD值就越大,所以对于作用时间也不是越长久越好,要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求检测孔内不能有气泡。CCK8系列简称终于来了.江苏cck8细胞增殖实验原理

实验原理:CellCountingKit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。天津共培养细胞cck8换液的意思是将cck8加在培养基中以换液的形式加在孔板中避免气泡产生。

CCK8,即Cell Counting Kit-8,与MTT法的主要区别如下:一、原理不同1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法:其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下)。2.向培养板加入10ml不同浓度的待测物质。3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D值的读数)。5.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7.如果暂时不测定O.D值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉***的影响。当然***影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。主要是重复性优于MTT;

CCK法的操作步骤(更多内容请见说明书):实验一:细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5%CO2)。2、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。上海cck8细胞生长曲线

接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不一致。江苏cck8细胞增殖实验原理

培养板对CCK8测定的影响:不同公司的培养板,以及培养板是否经过处理对读数都有一定的影响。所以前后实验要一致。另外在培养箱中,培养板**外一圈的孔容易干燥挥发,从而能导致培养基的体积不一样,增加误差。如果有可能,**外一圈的孔只加高压灭菌的PBS或ddH2O。另外,注意CCK-8不要贴在板壁上。一定要注意是否是***有问题。解决的方案就是可以在测定CCK-8的读数前,换个细胞液,再测定。这样会有一定的影响,但是影响的是所有的,所以均一性还算比较好。江苏cck8细胞增殖实验原理

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