北京cck8细胞活性

3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；4、***作用完毕后，每孔加入50ulMTT,继续作用4小时；5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。CCK8检测细胞增殖和毒性实验.北京cck8细胞活性

五、实验注意事项：·若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。·如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。·当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μl培养基)。北京cck8粉末CCK8原理、优势和步骤.

实验材料及试剂96孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按4×103个接种至96孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养48h后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养4h后，用酶标仪测波长为450nm的OD值。实验重复3次，取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率＝[(对照组OD－实验组OD)/对照组OD]×**，以分组为横坐标，生长***率为纵坐标，绘制细胞生长

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加药物，只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。

当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，但供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。

不同的种板数对检测***的IC50影响大吗？

切记一定要使用无血清的基础培养基，一是可以排除血清对细胞生长的影响；二是血清的存在会对吸光度的测量产生影响。以上是MTT比色法的介绍，MTT比色法因为涉及到吸出培养基溶解沉淀的操作，所以更适用于贴壁细胞，悬浮细胞比较好选用CCK8检测细胞增殖，下面给大家介绍一下CCK8操作的注意事项。CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性，可以直接加入细胞中长时间孵育，而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验，需在此之前加入作用***培养适当时间，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8检测液。用酶标仪测定在450nm处的吸光度。北京cck8细胞活性

CCK8试验的总体实验心得.北京cck8细胞活性

CCK8检测原理图2操作步骤1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、细胞处理（不同实验处理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。6、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。北京cck8细胞活性