上海悬浮细胞 cck8

实验材料及试剂

96 孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。

实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按 4×103个接种至 96 孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养 48h 后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含 10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养 4h 后，用酶标仪测波长为450 nm的OD值。实验重复 3 次， 取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率＝[(对照组 OD－实验组 OD)/对照组 OD]  ×**，以分组为横坐标，生长***率为纵坐标，绘制细胞生长***率柱状图。 水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞.上海悬浮细胞 cck8

统一铺好后，待细胞完全沉淀下来后，在显微镜下观察各实验组的细胞密度，如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量再次铺板（如：发现NC组细胞较多，降低细胞量再次铺板），放入细胞培养箱中培养。4.从铺板后第二天开始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培养基为100μl，则加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培养基为200μl，则加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。上海悬浮细胞 cck8培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基。

CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。颜色也会越深 **药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8.浙江cck8需要避光吗

CCK-8 反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。上海悬浮细胞 cck8

没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提，如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。上海悬浮细胞 cck8