原代细胞转染试剂对照

胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要！！当然也要保证细胞状态特别好，没有细微污染，铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦！

载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统，当然使用三质粒系统的小伙伴居多，一定要选择成熟商业化的载体系统！载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失，或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯：建议目的基因载体和阴性对照GFP 载体是同一批，且建议每次包装都如此操作，要保证目的基因的表达载体构建纯化良好，质粒间比例得当，并且对质粒进行酶切验证. 转染的细胞类型可简单分为两大类，连续细胞系和原代细胞。原代细胞转染试剂对照

LNCap细胞的培养和传代严格由ATCC建议的操作步骤进行，与pBabe-hygro-SSeCKs（1.5ug）和pEGFP-N3（1:1，共1.0微克）共转染（6孔板中每孔的量），并用LipoD293™试剂（左图）和FugeneHD（右图）分别按照生产制造商的科学实验步骤进行转染。转染24小时后，用尼康Eclipse2000荧光显微镜检测GFP荧光，以此来评价转染效率。在血清和***的存在下，HepG2和SaoS-2细胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分别转染达到95%的细胞融合。转染48小时后，分别通过Zeiss510激光共聚焦显微镜和β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测效率。roche转染试剂对照惊艳登场!临床级载体生产必备转染试剂。

将胶质瘤干细胞（3×105）接种至6孔板中，然后使用riboFECTCP转染试剂分别将5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA转染进胶质瘤干细胞（DP3321、DP7857）中，48h后，qRT-PCR和westernblots检测siRNA***效率。结果发现DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表达水平分别为46.32％、49.71％和43.64％，DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表达水平分别为53.21％、47.46％和46.31％。将1.25μlTREM-1siRNA（20μm）和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以产生转染混合物。然后将混合物加入DMEM（siRNA浓度：50nM）中，与原代小胶质细胞培养48h。RT-PCR和westernblot分析检测转染效率。结果发现转染TREM-1siRNA后******了OGD诱导的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上调。

LipoFectMax™转染试剂 LipoFectMax™转染试剂具有以下几个优点：高转染效率，适用于多种细胞系对细胞毒性低适用于DNA和RNA的转染转染前无需去除细胞培养基或血清转染后无需清洗细胞或更换培养基

1转染效率高，适用于多种细胞系图1. LipoFectMax™转染试剂以绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒转染几种常见细胞系，通过检测GFP信号比较转染效率。

2细胞毒性低图2.LipoFectMax™ ，LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作，通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。 随后分离血清并检测FVII蛋白的水平（Biophen 显色检测）。

转染产品知多少：转染试剂选择工具收录于话题转染是将核酸导入真核细胞中的过程，是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。不同的实验方案和技术差别巨大，我们可以利用化学方法或脂质体将核酸(DNA或RNA)高效输送到细胞内，也可以使用电穿孔方法利用电流在细胞膜上开孔，使核酸进入细胞内。赛默飞提供了多种高质量的转染产品，适用于各种细胞类型的转染。如何选择**受信赖的可用于转染的系统，是实验结果的重要影响因素。转染产品知多少——siRNA转染试剂.细胞转染试剂多少钱

但相对于连续细胞系，它们通常更难培养和转染。原代细胞转染试剂对照

对 HepG2 细胞转染效率的比较

右图：使用以上转染试剂将 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生产商的提供的转染步骤转染到 HepG2 细胞（在胶原预处理的培养皿中培养）。在转染 48 小时之后，用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞（%）和荧光强度。

左图：血清和***存在的条件下能提高 LipoD293 试剂（升级版）对在 HepG2 细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染 HepG2 细胞（生长在胶原处理的培养皿上）---无血清和***，10% 血清和***的存在，转染 5 小时后换液和不换液。

原代细胞转染试剂对照