上海细胞转染试剂类型

时间:2022年05月07日 来源:

对 HepG2 细胞转染效率的比较

右图:使用以上转染试剂将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产商的提供的转染步骤转染到 HepG2 细胞(在胶原预处理的培养皿中培养)。在转染 48 小时之后,用流式细胞仪检测 GFP 阳性细胞(%)和荧光强度。

左图:血清和***存在的条件下能提高 LipoD293 试剂(升级版)对在 HepG2 细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染 HepG2 细胞(生长在胶原处理的培养皿上)---无血清和***,10% 血清和***的存在,转染 5 小时后换液和不换液。

转染试剂实现了更高的有效***细胞/未转染细胞比率,超过其他RNAi试剂。上海细胞转染试剂类型

用LipoFectMax™转染Hela细胞,左图转染GFP cDNA,右图共转染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。转染siRNA后可以从右图明显看到基因沉默。

4适用于神经细胞的转染图4.  用LipoFectMax™ 和LipoFectamine®2000分别对小鼠神经元细胞进行转染绿色荧光白蛋白(GFP),转染24小时后观察转染效果,LipoFectMax™ 转染效率(左图)比LipoFectamine®2000(右图)高5倍。

LipoFectMax™ 转染试剂转染试剂操作流程

细胞毒性低图2.LipoFectMax™ ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。 pei转染试剂并更换培养基,继续培养24 h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。

LipoFectMax™转染试剂LipoFectMax™转染试剂具有以下几个优点:高转染效率,适用于多种细胞系对细胞毒性低适用于DNA和RNA的转染转染前无需去除细胞培养基或血清转染后无需清洗细胞或更换培养基转染效率高,适用于多种细胞系图1.LipoFectMax™转染试剂以绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒转染几种常见细胞系,通过检测GFP信号比较转染效率。细胞毒性低图2.LipoFectMax™,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。惊艳登场!临床级载体生产必备转染试剂。

用于转染的Invivofectamine 3.0试剂及RNAi复合物非常容易获得:只需简单地混合,并进行孵育(30min)、稀释、及注射即可。

靶向敲低

在实验靶标中可观察到高达85%的敲低效果

使用Invivofectamine 3.0试剂可在单次静脉注射后即可在肝脏中实现靶向敲低。Invivofectamine 3.0试剂与靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA组成的复合物,以每千克小鼠体重1 mg(mg/kg)的注射量进行注射,**终靶向mRNA水平出现了高达85%的敲低(使用TaqMan分析对敲低进行评估)。 连续细胞系具有无限增殖的潜能,通常要比原代或有限细胞更易处理.pei转染试剂

无论有无血清、***存在均可获得很高的转染效率。上海细胞转染试剂类型

在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)转染效率的比较

图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供

制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293™试剂(左图)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右图)分别将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后,用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光,以此来评价转染效率。

对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较

图片由罗斯威尔公园**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供



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