双电极膜片钳专题

离子通道是一种特殊的膜蛋白，它横跨整个膜结构，是细胞内部与部外联系的桥梁和细胞内外物质交换的孔道，当通道开放时。细胞内外的一些无机离子如Na，kCa等带电离子可经通道顺浓度梯度或电位梯度进行跨膜扩散，从而形成这些带电离子在膜内外的不同分布态势，这种态势和在不同状态下的动态变化是可兴奋细胞静息电位和动作电的基础。这些无机离子通过离子通道的进围所产生的电活动是生命活动的基础，只有在此基础上才可能有腺体分泌、肌肉收缩、基因表达、新陈代谢等生命活动。离子通道结构和功能障碍决定了许多疾病的发生和发展。因此，了解离子通道的结构、功能以及结构与功能的关系对于从分子水平深入探讨某些疾病的病理生理机制、发现特异药物或措施等均具有十分重要的理论和实际意义。滔博生物TOP-Bright专注基于多种离子通道靶点的化合物体外筛选,服务于全球药企的膜片钳公司,快速获得实验结果,专业团队,7*41小时随时人工在线咨询.全自动膜片钳技术的出现标志着膜片钳技术已经发展到了一个崭新阶段。双电极膜片钳专题

膜片钳放大器的工作模式；(1)电压钳制模式:在钳制细胞膜电位的基础上改变膜电位，记录离子通道电流的变化，如通道电流；EPSC；IPSC等电流信号它是膜片钳的基本工作模式。(2)屯留钳向细胞注入刺激电流，记录膜电位对刺激电流的响应。记录的是动作电位，EPSP；IPSP等电压信号膜片钳技术实现膜电位固定的关键是在玻璃微电极前沿与细胞膜之间形成高阻(10GΩ)密封，使与电极前开口相连的细胞膜与周围环境电隔离，通过施加指令电压来钳制膜电位。芬兰高通量全自动膜片钳电生理技术细胞膜由脂类双分子层和和蛋白质构成。

膜片钳技术的建立。抛光并填充玻璃管微电极，并将其固定在电极支架中。2.通过与电极支架连接的导管向微电极施加压力，直到电极浸入记录槽溶液中。3.当电极浸入溶液中时，给电极一个测量脉冲(命令电压，如5-10ms，10mV)读取电流，根据欧姆定律计算电阻。4.通过膜片钳放大器的控制键将微电极前端的连接电位调至零。这种电势差是由电极中的填充溶液和浸浴之间的不同离子成分的迁移引起的。5.用显微操作器将微电极前缘靠近直视下待记录的细胞表面，观察电流的变化，直至阻抗达到1gω以上，形成“干封”6。将静息膜电位调整到预期的钳制电压水平，这样当细胞没有钳制到零时，放大器可以从“搜索”变为“电压钳制”。

资料分析：一般电学性质∶通过I/V关系计算得到单通道电导，观察通道有无整流。通过离子选择性、翻转电位或其它通道的条件初步确定通道类型。通道动力学分析∶开放时间、开放概率、关闭时间、通道的时间依赖性失活、开放与关闭类型（簇状猝发，Burst）样开放与闪动样短暂关闭（flickering），化学门控性通道的开、关速率常数等数据。药理学研究∶研究的药物，阻断剂、激动剂或其它调制因素对通道活动的影响情况。综合分析得出结沦。全细胞膜片钳记录是应用较早，也是普遍的钳位技术。

电压钳技术是由科尔发明的，并在20世纪初由霍奇金和赫胥黎完善。其设计的主要目的是证明动作电位的产生机制，即动作电位的峰值电位是由于膜对钠的通透性瞬间增加。但当时还没有直接测量膜通透性的方法，所以用膜电导来测量离子通透性。膜电导测量的基础是电学中的欧姆定律，如膜Na电导GNa与电化学驱动力(Em-ENa)的关系，膜电流INaGNa=INa/(Em-ENa)。因此，可以通过测量膜电流，然后利用欧姆定律来计算膜电导。然而，膜电导可以通过使用膜电流来计算。这个条件是通过电压钳技术实现的。下一张幻灯片中右边的两张图显示了squid的动作电位和动作电位过程中膜电流的变化，这是霍奇金和赫胥黎在半个世纪前用电压钳记录的。他们的实验证明了参与动作电位的离子电流由三种成分组成:Na、K、Cl。对这些离子流进行了定量分析。这项技术为阐明动作电位的本质和离子通道的研究做出了巨大贡献。一些学者建立了组织切片膜片钳技术（Slicepatch），就能在哺乳动物脑片制备上做全细胞记录。美国双分子层膜片钳厂家

封接（seal）是膜片钳记录的关键步骤之一。双电极膜片钳专题

膜片钳在通道研究中起着重要的作用。膜片钳技术可以直接观察和区分单个离子通道电流及其开闭时间，区分离子通道的离子选择性，同时发现新的离子通道和亚型，在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上，进一步计算细胞膜上的通道数和开放概率。也可用于研究某些细胞内或细胞外物质对离子通道的开闭和通道电流的影响。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术，膜片钳技术可用于研究离子通道的分子结构与生物学功能的关系。膜片钳技术也可用于分析药物对其靶受体的作用位点。例如，神经元烟碱受体是配体门控离子通道，膜片钳全细胞记录技术可以通过记录烟碱诱发电流，直接反映神经元烟碱受体活动的全过程，包括受体与其激动剂和拮抗剂的亲和力、离子通道开闭的动态特征、受体的***等。用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对烟碱受体兴奋的量效曲线的影响，以确定其作用的动态特征。然后根据拮抗剂对受体***的影响分析，拮抗剂的作用是否是电压依赖性和使用依赖性的，我们可以从功能上区分拮抗剂对烟碱受体的不同作用位点，即判断拮抗剂是作用于受体的激动剂识别位点、离子通道还是其他变构位点。双电极膜片钳专题