FBS替代品血小板裂解液protocol

时间:2023年07月29日 来源:

细胞培养基制备1.比较好在4°C下解冻ELAREMPrime血小板裂解液过夜或在37°C水浴中解冻1小时。2.通过将10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基础培养基(即MEMα、GlutaMAX补充剂、无核苷)和1%的青霉素/链霉素作为**终浓度来制备完整的细胞培养基。3.应在完全细胞培养基中加入肝素以抗凝。我们建议添加肝素的**终浓度为2IU/mLPLSUPPLEMENT(货号PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(货号PL-SUP-500-XF).4.完整细胞培养基可在4°C下储存,并稳定约4周储存和稳定性ELAREMPrime在标签上注明的失效日期之前是稳定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C(或在-80°C进行长期储存)冷冻储存时稳定。解冻后,建议将未使用的ELAREMPrime样品分装并在-20°C下重新冷冻。应避免ELAREMPrime的重复冻融循环,因为这会导不溶性颗粒形成的增加。使用时,只需预热一份完整的细胞培养基,并将剩余的培养基冷藏在4-8°C。  

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ELAREMPrime人血小板裂解液是面向未来需求的先进的细胞培养解决方案。基于人血小板的经济实惠的细胞生长促进剂可实现从动物血清添加剂到无异种细胞培养条件的简单转换。每批ELAREMPrime均由大量血小板单位生产,以比较大限度地减少批次间的差异。ELAREMPrime支持细胞扩增,无需批间测试即可提供一致的试验结果。ELAREMPrime只供体外实验和研究使用(RUO),该产品不适合直接用于人类或动物用途。有关安全预防措施,请参阅相应的SDS。推荐用于与FBS相比,ELAREMPrime人血小板裂解液支持间充质干细胞(MSC)的细胞生长性能,而不会丢失表型。非灵长类细胞系的体外繁殖和维持需要根据具体情况进行测试和优化。

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血小板中含有很多不同的细胞生长因子,包括PDGF,VEGF,EGF等,实践证明,血小板分泌的细胞生长因子能够对多种细胞起到支持生长的作用,可以完全替代胎牛血清(FBS)甚至于在支持一些细胞培养的效果上优于FBS。本产品是将多人份浓缩血小板混合后裂解而成,产品均一性好,经过了严格安全性有效性质量检控。人血小板裂解液能够支持包括间充质干细胞成骨分化,成脂分化,造血干细胞以及诱导性多能干细胞的生长等。是这些细胞公认的动物源血清替代品。  

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本研究中使用的HPL是Stemulate公司两款人源血小板裂解液(NH和H)是在工业规模(很小批量为20L)生产的,具备高度的批间一致性。将脂肪来源的间充质干细胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS进行传代培养11代。在DME/F-12中分别添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并与10%胎牛血清进行比较。羊膜来源间充质干细胞也在2.5或5%Stemulate中培养,与10%胎牛血清相比。牙髓来源的骨髓间充质干细胞在DME/F-12中添加不同浓度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并与添加10%FBS的培养基进行比较。在所有实验中,每天都监测细胞,每次传代结束时,收获细胞,并使用台盼蓝和一个自动细胞计数器计数然后继续传代。 

美国Sexton的血小板裂解液的血小板来源于美国FDA注册、AABB认证的美国血库。单位必须在过期前接受异体输血。血小板捐献者接受捐赠前进行彻底筛查和检测,以降低输血传播ganran的风险,根据21CFR610和AABB血库和输血服务标准。

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