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反相色谱法 一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、正己烷、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用**为***,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展,反相色谱法的应用范围逐渐扩大,现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。 上海HPLC腈化学成分就选尚辰HPLC腈化学成分。口碑好的低波段HPLC高效液相色谱乙腈批发
乙腈的粘性比甲醇小,因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应,从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相,让它静置几分钟后在制备。甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性,就是甲醇和水的50/50混合物会产生一高效液相色谱仪的一个基本要求是样品完全溶解在流动相中。在分析前,将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部,以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相,那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多类型的样品。这一改进的溶解度可能导致更好的整体峰形。甲醇的选择性也不同于乙腈,这可能导致峰洗脱时间与预期的保留时间不同。个比甲醇或水更高的系统和柱背压。云南有口碑的低波段HPLC高效液相色谱乙腈上海HPLC腈化学成分会赚到钱吗?
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峰形
用时出现差异。像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈类时拖尾大,用甲醇类可***。可是,一般情况下,聚合物类反相柱,与硅胶柱相比,更具有峰形宽的倾向,特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见。这在流动相是甲醇时非常***,而用乙腈时不明显。为此,用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类),这是因为乙腈使凝胶膨润。
7、流动相的脱气,乙腈类要注意
甲醇与水混合时发热,多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易)
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对于HPLC级溶剂,乙腈的吸光度在这两种溶剂中比较低,非常适合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有较高的紫外光截止值,在非常低的紫外光范围内略有限制。乙腈和甲醇在溶解多种缓冲盐和样品的能力上存在明显差异。这些差异在方法开发中至关重要。大多数与高效液相色谱仪应用一起使用的缓冲溶液会有更高的盐浓度,当分析条件中有机溶剂含量较高时可能会从溶液中析出,导致堵塞,泄漏,插头和不准确的结果 乙腈的粘性比甲醇小,因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应,从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相,让它静置几分钟后在制备。甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性,就是甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。乙腈的粘性比甲醇小,因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应,从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相,让它静置几分钟后在制备。甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性,就是甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。高效液相色谱仪的一个基本要求是样品完全溶解在流动相中。在分析前,将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部,以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相,那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多类型的样品。这一改进的溶解度可能导致更好的整体峰形。甲醇的选择性也不同于乙腈,这可能导致峰洗脱时间与预期的保留时间不同。上海上海HPLC腈化学成分哪家强?虹口区口碑好的低波段HPLC高效液相色谱乙腈
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分离(洗脱)的选择性
两者的差异,乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性不同所致。因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看。
洗脱能力 一般而言,乙腈较强。乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时,从苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些。溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小。 口碑好的低波段HPLC高效液相色谱乙腈批发
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