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    未经允许不可转载，否则视作侵权，我们将依法追究法律责任。若需转载，请联系微信公众号后台、仇华吉研究员、文章作者授权，感谢您的支持与配合；我们所有刊登的文章*供养猪人参考学习，若有不妥之处，欢迎批评、指正。▼第1期“抗非大家谈”▼【1】仇华吉：非洲猪瘟是一种可管理的疫病【2】余旭平：非洲猪瘟可防可控，生物安全：让非洲猪瘟病毒遇不到猪【3】高远飞：用“铁桶模式”提高抗击非洲猪瘟的可靠性【4】郭廷俊：防控非洲猪瘟要重视提高猪群非特异性***【5】樊福好：非洲猪瘟检测瓶颈之核酸提取与纯化【6】韩春光：防控非洲猪瘟的几点体会和对行业的见解【7】曹松嵘：临床防控非瘟需注重细节和化繁为简【8】何启盖：要科学防控非洲猪瘟【9】王爱勇：防控非洲猪瘟需要系统思维【10】游启雄：保猪净化，有道可寻【11】邵国青：非洲猪瘟发生一周年自问自答【12】范卫彬：操作不规范是非洲猪瘟防控失败的**主要原因【13】唐红宾：“善待猪，提供生理舒适度、原料清洁度和营养均衡度。视频图像、对讲自动弹出台面 , 主管下达授权指令。江西智能周转箱

    HJ480-2018）于2019年1月9日完成自我声明检验机构标准变更，检查组于2019年10月17日到现场监督检查未能提供方法变更验证佐证材料。6、编号为大正检（环）字2019第106号报告地表水中石油类采样和分析的量（1000mL）不满足标准方法要求（500mL）。7、编号为大正检（环）字2019第053号报告烟气参数检测依据使用（固定源废气监测技术规范HJ/T397-2007），不符合要求，应该使用固定污染源排气中颗粒物测定与气态污染物采样方法GB/T16157-1996；颗粒物检测原始记录中烟气参数数据不完整。8、编号为大正检（环）字2019第052号报告废气中氨吸收液体积使用10mL,不满足标准中要求的50mL的吸收液；计算中直接使用采样体积未折算成标态体积。9、编号为大正检（环）字2019第108号报告总铬的测定使用六价铬的质控样做准确度；原始记录中标准曲线的绘制没有标液的移取体积，无法进行溯源；色度分析的原始记录数据不满足标准方法的测定（直接稀释20倍，结果以20表示。）。10、采样编号为粪大肠菌群样品（）采用作废标准（HJ/T347-2007）进行检测，但尚未出具检测报告。浙江环资检测集团有限公司1、检测室硝酸浸泡缸无硝酸浓度及配置时间。2、编号为浙环检气字。陕西共享物流箱人工浪费、货损浪费，还可以在非危散装液体、生鲜果蔬、快消品、商超及电商、汽车制造。

    通过细菌转录组研究来揭示生命基本过程，如生命形成、生物进化、基础代谢、疾病发生、药物靶点等，成为生物学研究的重要手段。随着RNA测序价格的日益低廉，RNA测序逐渐成为筛选分子生物学后续研究方向的**省时、省力、**经济的方法，研究者往往使用RNA测序来推进项目的进展。然而，许多新入行的研究者对细菌RNA-Seq测序样品准备相关步骤知之甚少，基于此本文将对细菌转录组样本制备过程进行详细说明。关键词：细菌，转录组，样品制备，RNA-Seq材料与试剂表1.实验所需材料及试剂×TAE缓冲液aladdin生物工程有限公司T197242DNALadderPromega生物工程有限公司Z5300AgaroseRNAisoplus（Takara）MICROBExpressKit（Ambion）中科瑞泰生物科技有限公司TaKaRa公司Ambion公司9012-36-6T9180AM1905产品名称生产公司商品型号glycerolaladdin生物工程有限公司G116205PrimeScriptTM1ststrandcDNASynthesisDNA1000LabChipTaKaRa生物工程有限公司Caliper生物科技有限公司6110AG293810×PCRBuffer。

    RNA质量评价首先要通过凝胶电泳图来对其进行初步分析。主要需查看以下几方面：目的条带是否明亮清晰；泳道内是否有明显的降解弥散区；胶孔处有无蛋白污染；有无DNA污染；有无外源物种核酸污染等[10]。由下文结果示例可以看出，该总RNA的凝胶电泳图目的条带明亮清晰，泳道无弥散区，无蛋白和DNA的污染。由此得出结论该样品质量较好，如图5所示（图5为bioanalyzer获得）。失败案例如图6所示（图6为凝胶电泳图）。图（2017，HanDF等）(goodquality)（Bio-Rad）图（2020，派森诺生物科技有限公司实例分析）a.胶孔处蛋白污染(poorquality)..（2）RNA质量评价标准——电泳图及RIN值。在凝胶电泳检测完成后，需要对其进行bioanalyzer分析。图7为bioanalyzer（Bio-Rad）原核生物典型电泳图。**左侧峰为Ladder峰，中间峰为16SrRNA，**右侧峰为23SrRNA。整体样品峰图基线较为平整，峰型较好，无拖尾峰、前沿峰、包裹峰及多余的降解峰。通过mRNA富集前后对比电泳图，可以清晰地看到mRNA富集程度（即16SrRNA、23SrRNA去除程度）。若样本采用Agilentbioanalyzer2100质检。则需判别其RIN值，RIN值即为RNA完整值（RNAintegritynumber），上样完成后，质检报告中会显示其具体数值。该子系统是其他子系统间相互联系的桥梁和纽带 , 也是一个综合管理平台。

    栏舍消毒可分为空栏消毒和带猪消毒，空栏消毒是指当全部栏舍或小单元清空后，对栏舍进行清理、清洗、干燥、消毒、再干燥等程序，确保栏舍洁净、干燥，可采取火焰灼烧、喷雾消毒、熏蒸消毒、石灰乳或相结合的方式进行；带猪消毒是指对有猪存在的栏舍进行消毒，多采用喷雾消毒的方式进行，一般有固定的时间和消毒频率。带猪消毒要避开阴雨潮湿的天气，多在晴朗、干燥、微风、温度适宜的时间段进行。环境消毒多采用喷雾消毒的方式进行，消毒的时间和频率要根据场内实际情况确定。道路消毒可采用喷雾消毒或石灰乳泼淋的方式进行。栏舍门口的消毒主要是对人员的鞋子进行消毒，多采用消毒池或生石灰垫的方式，根据场内情况、天气、季节来选择合适的方式。猪群免疫体系建设对猪群进行免疫注射是当前预防大多数病毒性疾病的有效措施，猪场免疫体系的建设包括以下几个步骤：1）确定免疫谱和主要疾病；2）确定疫苗性质、种类，免疫剂量、途径、方法；3）确定***免疫时间；4）确定是否加强免疫和间隔时间；5）确定基础免疫程序，并不断优化。猪群保健体系建设猪场保健体系主要是针对细菌性疾病和寄生虫进行的一种综合性措施，保健程序需要根据当地猪病流行情况。为应对这些挑战，杭州晶控电子有限公司，率先在全球推出了具备云安全技术的物联网智能保险箱。吉林物证安全箱

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    Ambion）、RiboMinusbacteriatranscriptomeisolationKit（Invitrogen）、Ribo-ZerorRNAremovalKit（Epicentre）等。本文以MICROBExpressKit（Ambion）试剂盒为例进行说明，该试剂盒适用于绝大多数细菌种属（古细菌、支原体等不可用）。其原理为：16S和23SrRNA与总RNA样本进行杂交，使用与rRNA互补的寡核苷酸探针进行杂交后，带有16S和23SrRNA的磁珠在磁力的作用下，移至管子的一侧[6]。上清液中浓缩的RNA被转移至新的试管中。洗涤磁珠，以保证磁珠上没有RNA的残留。**后用乙醇沉淀RNA。此过程产生的RNA包含mRNA、tRNA、5SrRNA和其他小RNA（图3）。实验具体操作步骤如下：图2.细胞内RNA分布图（1）将2-10μg总RNA添加到200μL结合缓冲液中。（2）加入4μLCaptureOligoMix。（3）加热至70℃，10min。（4）37℃，持续15min。（5）每个样品取出50μLOligoMagBeads到mL管中。（6）使用磁力试管架捕获OligoMagBeads，并小心地移除和丢弃上清液。（7）用等量的无核酸酶水清洗OligoMagBeads。（8）通过与相同体积的缓冲液结合，以平衡OligoMagBeads。（9）重新悬浮OligoMagBeads至相同体积的缓冲液中，并使缓冲液达到37℃。（10）同时将洗涤液预热至37℃（11）在RNA预制液中。江西智能周转箱