溧阳哺乳动物细胞生长培养基

时间:2023年01月05日 来源:

进口的胎牛血清:过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,好的血清应是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。1、如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性,若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。2、总蛋白含量,胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采集血液的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。3、血红蛋白,标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高,反之,数值越低。胎牛血清起酸碱度缓冲液作用。溧阳哺乳动物细胞生长培养基

胎牛血清的保存方法:1、需要长期保存的胎牛血清须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏,而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。3、胎牛血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。盐城RPMI 1640 Medium胎牛血清勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质更高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分更少。胎牛血清各项质量指标符合2005版《中华人民共和国药典》第三部附录的要求。1、性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量3.5%~5.0%(w/v)3、血红蛋白含量≤0.02%(w/v)4、无菌检验:阴性。5、支原体检验:阴性。6、细菌内有害元素≤5(EU/ml)7、牛腹泻病毒,阴性,8、大肠杆菌噬菌体,阴性,9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线(接种浓度)更大增殖浓度≥2.5×106个/ml,细胞倍增时间≤15h,克隆率≥85%。

细胞和组织培养为什么需要使用血清?血清通常作为补充剂,以2-10%的浓度加入培养基中,为细胞提供综合营养、元素、生长和附着因子。血清还可作为细胞培养系统的缓冲液,避免各种因素(包括pH变化、蛋白水解活性或重金属、内毒等)干扰细胞生长或产生毒性作用。血清是如何加工的?血清采集后冷冻运输至加工工厂,解冻并检测细菌、病毒、内有害元素和血红蛋白含量等多项指标。选择更优良的血清在无菌环境下进行系列膜过滤无菌处理,然后在无菌环境下进行分装并快速冻存于-20°C,在所有批次验证达到或找过QC标准之前隔离存放。真正的胎牛血清凝血功容易破裂。

胎牛血清给细胞提供的益处主要体现在6个方面:1、提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。2、提供天然的结合蛋白,能识别氨基酸、脂质、金属离子和元素等,能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多个钙离子结合位点,因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。3、天然含有粘附蛋白等细胞外基质成分,促进细胞的附着、铺展。4、提供消毒功能。这主要通过血清中的某些蛋白与有毒的金属离子结合来完成的。如金属硫蛋白,对多种重金属有高度亲和性,并可清理细胞生长环境中的氧自由基(·O),具有很强的抗氧化活性,可防止细胞衰老。5、提供酸碱度缓冲的作用,以及维持渗透压。6、提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。因此在细胞消化时,常用含血清的培养液终止胰酶对细胞的作用。胎牛血清的完全培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。海门类胎牛血清Fetal Bovine Serum (Similar)

胎牛血清可以提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。溧阳哺乳动物细胞生长培养基

胎牛血清工艺流程:γ辐照处理,使用经过认证的工艺对冻存的血清进行25-40kGy剂量的γ辐照处理,并确保每批次的每瓶血清都能均匀受到辐照作用。经过γ射线辐射的血清所含病毒和外来微生物污染的可能性降低了上百万倍,而与此同时,血清的促细胞生长作用不受辐照的影响。QC检测,采用严格标准进行多次多项检测,包括牛呼吸道融合病毒(BRSV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛细小病毒(BPV)、蓝舌病毒(BTV)、牛腺病毒(BAdV)、狂犬病毒(RABV)、呼吸道肠道病毒(REO)等病毒检测、支原体、内有害元素、血红蛋白、IgG含量、细胞生长验证以及多项生理生化检测,确保产品具有可信赖的超高等。溧阳哺乳动物细胞生长培养基

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