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细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。

MTT实验操作

1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：

2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时； 不同的种板数对检测***的IC50影响大吗？江苏cck8 od值大于2

特点不同1、Cell Counting Kit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞；无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；适合于高通量***筛选。2、MTT法：特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、Cell Counting Kit-8：主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。浙江cck8测细胞增殖细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育2小时左右就可以了。

6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度（使用酶标仪之前要提前开启10min预热）测定完成后，保存数据。

7.连续五天检测，每天保持一样的时间点加入CCK-8溶液，在培养箱内孵育时间相同。

注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。

五、实验注意事项：

· 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

· 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。 CCK8系列简称终于来了.

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候，当时用的***个盒子是Sigma的，当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励，因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的，品质有保证，***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时，我们在有选择的情况下都会买sigma，下图2是sigma官网的截图。其实也不贵，只是到货时间太慢。

代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。北京cck8 graphpad 作图

在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）.江苏cck8 od值大于2

统一铺好后，待细胞完全沉淀下来后，在显微镜下观察各实验组的细胞密度，如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量再次铺板（如：发现NC组细胞较多，降低细胞量再次铺板），放入细胞培养箱中培养。

4.从铺板后第二天开始，每孔加入10-20μl CCK-8溶液，如果每孔的培养基为100μl，则加入10μl CCK-8溶液，如果每孔的培养基为200μl，则加入20μl CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 江苏cck8 od值大于2