北京cck8 波长

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。北京cck8 波长

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul上海cck8结果图CCK8试验的总体实验心得.

制作标准曲线1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，O.D值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。

在做每个东西之前，都要搞清楚这个东西是什么。CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和细胞增殖相关的实验都可以。CCK-8的原理在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的**基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深（如图1，来自于Sigma）。水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞.

细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100ml/孔)。将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5%CO2的条件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5%CO2的条件下)。微生物对细胞的毒性或增殖的实验。浙江cck8检测细胞增殖步骤

CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法.北京cck8 波长

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8试剂含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），是近年新开发的一种更新的水溶性四唑盐检测，原理与WST-1类似：在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原成具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量，在一定细胞数量范围内甲臜形成的量与细胞数成正比。

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