上海cck8试验

CCK8的优点：方法方便，不用洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8快速检测；CCK-8检测灵敏度高，细胞密度低也可以检测；CCK-8的重复性优于MTT法；CCK-8对细胞的毒性很小；CCK-8细胞活性检测试剂中是1瓶溶液，不需要现用现配，即开即用。CCK8的缺点：相比于与MTT法，CCK8的价格比较昂贵生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比.上海cck8试验

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。颜色也会越深 湖北同仁cck8CCK8原理、优势和步骤.

细菌***对CCK8检测的影响：我们做***的，经常会做到细菌或***对细胞的影响。那这种情况下我们应该怎么办。其实细菌防御系统还是非常强大，单独和CCK-8在一起孵育时，不会发生还原反应，几乎不会和细菌发生显色反应。而细菌不需要入胞繁殖，所以结果还是可信的。**讨厌的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助细胞的东西来进行繁殖。繁殖过程中就需要消耗宿主的能量，会产生氧化还原反应，所以我用CCK-8来测定***对细胞活性的影响或者某个***对***复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。5、cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。请问合适的种板数是怎么定义的呢?

实验材料及试剂96孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按4×103个接种至96孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养48h后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养4h后，用酶标仪测波长为450nm的OD值。实验重复3次，取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率＝[(对照组OD－实验组OD)/对照组OD]×**，以分组为横坐标，生长***率为纵坐标，绘制细胞生长CCK8虽好,这些情况下不建议用!上海cck8细胞活性实验

加入CCK8那会空白对照组的细胞刚好长满吗？上海cck8试验

CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：实验一：细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。上海cck8试验

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