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经验总结及分享： 

CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提， 如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加***，只加细胞和CCK8。 CCK8虽好,这些情况下不建议用!江苏cck8统计方法小木虫

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。江苏cck8 日本培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基。

实验材料及试剂96孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按4×103个接种至96孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养48h后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养4h后，用酶标仪测波长为450nm的OD值。实验重复3次，取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率＝[(对照组OD－实验组OD)/对照组OD]×**，以分组为横坐标，生长***率为纵坐标，绘制细胞生长

CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项：1.加入CCK8溶液时不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数；2.要设计空白对照组；3.对于大多数情况，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶标仪之前要提前开启10min预热；5.若连续多天检测，必须保持所有条件一致。相关链接：CCK8的特性、保存方法以及与BrdU的区别CCK8空白对照，测定参比波长的设定以及OD值的合适范围CCK8标准曲线、检测时间、终止反应以及减少加样误差的方法外界因素(金属/***/细菌/培养基/培养板)对CCK8测定的影响细胞因素(预培养/生长方式/状态/细胞数/死细胞)对CCK8测定的影响细胞增殖到底用MTT还是CCK8呢?水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞.

细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100ml/孔)。将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5%CO2的条件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5%CO2的条件下)。各有千秋!CCK8之外的选择除了MTT,还可以是LDH.天津碧云天cck8

接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。江苏cck8统计方法小木虫

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候，当时用的***个盒子是Sigma的，当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励，因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的，品质有保证，***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时，我们在有选择的情况下都会买sigma，下图2是sigma官网的截图。其实也不贵，只是到货时间太慢。江苏cck8统计方法小木虫