江苏cck8细胞增殖实验步骤

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）.江苏cck8细胞增殖实验步骤

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。江苏测完cck8的细胞能去染色吗加入CCK8那会空白对照组的细胞刚好长满吗？

培养基对CCK8测定的影响：不同的培养基中含有氧化还原性物质不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），会与CCK8发生反应，产生实验误差，因此所用培养基要一致，不要更换其他培养基。比如DMEM空白吸收为0.93；1640培养基在0.5左右。另外培养基中有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可，可见空白孔非常重要，所以每次实验均要设定空白对照。另外，血清不影响测定。有师妹在做一个HIF1a***剂实验时，多加了这个***剂的浓度，

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。CCK8检测细胞增殖和毒性实验.

、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上述相同，只需把各个实验组改成各个作用时间就可以了。至于说***浓度的确定，网上有很多确认方法，个人建议以IC50值作为***浓度即可。计算方法，某园子里都有，就不在这里介绍了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培养液，以免将孔内的紫色结晶吸走。有条件的实验室，这一步可以采用离心机将沉淀充分离心到孔底，防止被吸出。如果没有这种类型的离心机，可以在测量吸光度的时候，将酶联免疫的机器震荡时间调制5分钟，**起码可以保证沉淀充分溶解。 化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).天津cck8实验

接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。江苏cck8细胞增殖实验步骤

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